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ミジンコ Daphnia magna におけるDachshund 相同遺伝子の解析


多田 宣紀  志賀 靖弘  山形 秀夫

東薬大・生命


<目的> 我々の研究室では、形態の多様性の成立と生物を形づくる形態形成遺伝子の分子進化の関係を、多様な形態 の生物からなる甲殻類に属するミジンコ(Daphnia magna)を使って明らかにしようとしている。本研究では甲殻類において特に多様性に富む付属肢形態に 関与する遺伝子の解析を行うことを目的とした。そこで今回は付属肢中間領域の形成に必須とされるDachs hund (DapDac) 遺伝子、先端領域の形成に必須とされるAristaless (DapAl) 遺伝子、基部領域の形成に必須とされるEscargot (DapEsg) 遺伝子に着目し、これらのmRNA、タンパク質の発現時期および発現領域の解析を試みた。
<方法と結果> 多種の生物で高く保存された領域を含むDapDac DNAフラグメントをプローブとしてミジンコcDNAライブラリーをスクリーニングした。得られたポジティブクロー ンの一部の塩基配列を決定し、予想されるアミノ酸配列をデータベース検索したところDachshundのミジ ンコにおける相同遺伝子の一部であることが明らかになった。胚発生過程におけるDapDacの発現時 期及び発現領域を解析するため、whole mount in situ hybridizationを行った。その結果、遠近軸の先端部を決定するミジンコDll遺伝子の発現と比較し、Da pDacは付属肢の先端部の形成に必須なDapDllやそのほか基部領域に必須な遺伝子と共に遠近軸 を形成し、中間領域に必須と考えて間違いなさそうであった。またタンパク質の発現時期及び発現領域を明ら かにするため抗DapDAC抗体を作製した。この事に関しては明らかになり次第報告する予定である。


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