日本発生生物学会第36回大会講演要旨　2P120

[2P120]

ヤマトヒメミミズの再生初期に発現する遺伝子の単離と解析

^○武尾真¹ 野呂知加子² 栃内新¹

北大・院理・生物¹，理研・BRC²

ヤマトヒメミミズは通常の飼育条件下では砕片分離と再生により無性的に増殖する。これまで行われてきた本種の再生に関する研究は実験形態学的手法が主であり、再生にかかわる遺伝子についての分子生物学的研究はほとんど行われていない。そこで、我々はヤマトヒメミミズ再生の分子生物学的研究を開始する手始めとして、再生の初期過程で発現が変化する遺伝子の単離および解析を行った。
サブトラクション法により、自切前と自切後6時間および12時間で発現量が異なる遺伝子断片クローンを101種類得た。それらすべてについて既知の遺伝子との相同性検索を行ったが、多くのものは低い相同性しか示さなかった。得られたクローンのうち、部分的ながらも発生や細胞増殖に関係した遺伝子と相同性を示したクローンについて半定量的PCRを行い、再生過程における発現量の変化を継時的に調べた。その結果、自切後12,24,あるいは48 時間に発現量が最少となり、脳や咽頭など自切前と同様の構造ができる96時間までに回復するパターンや、自切後96時間まで発現量が減少し続けるパターンなど、クローンにより様々に異なる挙動を示した。今回定量を行ったクローンの中には、切断面付近で細胞分裂が観察され始める直前の、自切後3時間で発現量が増加するものがあった。in situ hybridizationでこの遺伝子の発現組織を解析したところ、腸や表皮を構成する一部の細胞のほか、ネオブラストと思われる細胞で強く発現していた。再生時には腸や表皮で活発な細胞分裂が起こることや、ネオブラストが分裂しながら再生が形成に参加することなどから、この遺伝子は再生に参加する分裂中または分裂直前の細胞に特異的に発現するものである可能性が考えられた。今回はこのクローンの解析を中心に、いくつかのクローンについて再生過程における発現量の変化および発現組織について解析した結果を報告する。